PCR實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)主要基于實(shí)驗(yàn)流程、防止交叉污染、功能明確性、設(shè)備共享性及可擴(kuò)展性等原則進(jìn)行劃分,一般可分為以下四個(gè)區(qū)域:
1. 試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)(或試劑存放區(qū)):用于擴(kuò)增試劑的配制、分裝和保存。此區(qū)域應(yīng)保持微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入造成污染。
2. 標(biāo)本制備區(qū)(或樣品處理區(qū)):用于樣品的接收、登記、處理(如核酸提取、保存和加樣)等工作。此區(qū)域同樣應(yīng)保持微正壓,并配備生物安全柜等設(shè)備,以確保操作人員的安全。
3. 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)(或核酸擴(kuò)增區(qū)):是PCR實(shí)驗(yàn)的核心區(qū)域,用于DNA擴(kuò)增等實(shí)驗(yàn)操作。此區(qū)域應(yīng)保持微負(fù)壓,以防含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出去污染試劑與樣品。
4. 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):用于擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定、結(jié)果分析、登記及報(bào)告等工作。此區(qū)域同樣應(yīng)保持微負(fù)壓,并配備相應(yīng)的分析儀器和設(shè)備。
為避免交叉污染,進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行,即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)到標(biāo)本制備區(qū),再到擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū),最后到擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進(jìn)行。同時(shí),每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)應(yīng)設(shè)置緩沖區(qū),以減少室內(nèi)外空氣交換和交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。
此外,PCR實(shí)驗(yàn)室的安全分區(qū)也是確保實(shí)驗(yàn)室安全運(yùn)行的重要措施,包括人員出入控制、設(shè)備安全管理、實(shí)驗(yàn)物料分類管理、清潔消毒管理、廢棄物處理、應(yīng)急處理、人員培訓(xùn)、消防設(shè)施、防爆安全、輻射安全以及數(shù)據(jù)安全等方面的要求。